Cromatografía de Capa Fina   Thin Layer Chromatography
   
 

 

 

 
Historia
El botánico ruso Mikhail Tswett estableció las ventajas de la cromatografía y fué el primero en utilizar este término. Es recordado como el Padre de la Cromatografía.
Ismailov y Scraiber utilizaron láminas de vidrio para colocar capas muy delgadas de alúmina y luego aplicaron extractos vegetales, dando así la primera forma de Cromatografía de Capa Fina. Egon Stahl (1956) dió el nombre de Cromatografía de Capa Fina. Estandarizó los procedimientos, equipos y adsorbentes dando un auge a la técnica simple, a bajo costo y eficiente.
 
 

 

 

 
Proceso de Adsorción
La muestra aplicada en la capa es adsorbida en la superficie del material por la acción de fuerzas electrostáticas (fuerzas de Van der Waals, puentes de Hidrógeno, efectos inductivos, etc). Luego, cuando la capa es expuesta a un flujo por acción capilar, se inicia una competencia de enlaces entre los sitios activos del adsorbente y la substancia con el solvente.
 
 

 

 

 
Adsorbentes
Los adsorbentes más utilizados en la Cromatografía de Capa Fina son:
  • Silica gel (se utiliza en el 80% de las separaciones)
  • Óxido de Aluminio ó Alúmina (ácida, neutra ó básica)
  • Tierra Silícea ó Kieselguhr
  • Celulosa (Nativa o micro-cristalina)
  • Poliamidas

Estos adsorbentes deber tener las siguientes características:

  • Tamaño de Partícula
    • Volúmen de Poro
    • Diámetro de Poro
    • Área Superficial
  • Homogeneidad
  • Pureza
 
 

 

 

 

 

Preparación de la Placa Cromatográfica

 

Se usan como soporte del adsorbente láminas de: Vidrio, Plástico ó Metálicos (ej: Aluminio)
Los tamaños de la placa para TLC convencional son : 20 cm x 20 cm; 10 cm x 20 cm y 5 cm x 2 cm
Hay placas que contienen un indicadorr de Fluorescencia : F254 ó F366. El número que apararece como subíndice nos indica la longitud de onda de excitación del indicador utilizado.
 
 

 

 

 

 

Aplicación de la muestra  

La muestra se aplica en la placa según el objetivo: Analítico ó Preparativa en:

  • Banda
  • Punto ó Mancha
 
 

 

 

 

 

Desarrollo de la Placa  
Es un proceso mediante el cual son tranportados a través de la fase estacionaria por la fase móvil.
 
 

 

 

 

 

Elección del Solvente

 

 
 
 

 

 

 

 

Cámaras para Desarrollo  
Existen varios tipos de cámaras:
  • Normal
  • Doble Compartimiento
  • Sandwich
  • Horizontal
  • Vario KS
  • U
 
 

 

 

 

 

Detección ó Visualización

 

Si la muestra (mancha) no es coloreada se requiere de métodos que nos permitan visualizar el(los) componente(s) presentes. También se conoce este procedimiento como Revelado.

Estos métodos son:

  • Químicos (por inmersión o rociado). Se obtienen derivados coloreados o fluorescentes
  • Físicos (ópticos). Generalmente se utiliza radiación UV
 
 
 

 

 

 

 

Evaluación de un Cromatograma de Capa Fina

 

 
 
 

 

 

 

 

Análisis Cualitativo  
  • Medida de Rf
  • Comparación Visual de Color/Intensidad
  • Propiedades UV/IR/MS/NMR
 
 

 

 

 

 

Análisis Cuantitativo

 

  • Semi-cuantitativo
    • Comparación visual del diámetro y la intensidad del color de la mancha contra una serie de manchas patrones de concentración conocida
  • Cuantitativo
    • Indirecta
    • Directa
      • Densitometría
        • Medida de Transmisión. Medida de luz transmitida a través de la substancia.
        • Medida de Emisión. Medida de luz reflejada desde la substancia
      • Espectrofotometría
        • Fluorescencia
        • Fluorescencia con "quenching"
 
 

 

 

 

 

Referencias Bibliográficas Recomendadas

 

  1. ABBOTT, David y ANDREWS, R. S. Introducción a la Cromatografía. 3ra. Edición. Colección Exedra. Editorial Alhambra. España. 1973.
  2. BAUER, Karin ; GROS, Leo and SAUER, Werner. Thin Layer Chromatography: An Introduction. Hüthig Verlag. Germany. 1991
  3. BROWNING, D. R. Cromatografía-Toray-Masson. España. 1971.
  4. DOMINGUEZ, Xorge Alejandro. Cromatografía en Papel y en Capa Delgada. Serie de Química. Organización de los Estados Americanos. Nº 16. U.S.A. 1975
  5. GÖTZ, Wolfgang; SACHS, Albert and WIMMER, Hans. Thin-Layer Chromatography. Gustav Fisher. Verlag. Germany. 1980.
  6. JORK, H and WIMMER H. TLC Report: A Collection of Quantitative Papers. GIT Verlag. Germany. 1986.
  7. Reactivos de Coloración para Cromatografía en Capa Fina y en Papel. Merck. Alemania. 1980.
  8. PACHALY, Peter. Dünnschicht-Chromatographie in der Apotheke. Wissenshaftliche Verlagsgesellschaft. Germany. 1982.
  9. TOUCHSTONE, Joseph and DOBBINS, Murrell F. Practice of Thin Layer Chromatography. 2nd Edition. Willey Interscience. U.S.A. 1983.
  10. ZLATKIS, A. and KAISER, R.E. HPTLC. High Performance Thin-Layer Chromatography. Vol. 9. Journal of Chromatography Library. Elsevier. 1977.